结核感染T细胞斑点试验在HIV/AID

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结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核感染诊断中的应用灵敏度研究

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摘 要:目的:分析应用结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在HIV/AIDS合并结核感染诊断中的灵敏度。方法:选取2018年11月-2019年11月门诊HIV/AIDS合并结核感染患者35例和单纯性结核感染患者50例,对85例患者均实施T-SPOT.TB与结核菌素试验(PPD),对比诊断情况。结果:T-SPOT.TB的阳性率显著高于PPD,差异有统计学意义(P<0.05);T-SPOT.TB与PPD检验的敏感性并无差异,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:T-SPOT.TB检测的结果更为准确,具有较高的特异性、准确性,可作为临床诊断HIV/AIDS合并结核感染的主要方法。
关键词:T-spot试验 HIV/AIDS 结核感染 灵敏度 PPD试验

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是一种由人类免疫缺陷病毒(HIV)侵入机体感染后造成的危害性大、死亡率高的疾病,此类患者的细胞免疫能力低下,可合并存在多种机会性感染。结核病指的是因结核杆菌侵犯与感染的情况,不仅是HIV/AIDS的常见感染性疾病,同时也是造成患者死亡的重要原因,临床数据显示,约有40%的HIV/AIDS死于结核感染。在全球性结核病的调查报告中刚指出,HIV阳性患者的结核病发生可能性是正常人的26~30倍,在新发结核病患者中,超过12%的患者为HIV阳性,因而及时发现和诊断HIV/AIDS合并结核感染,对于合理干预具有重要意义。T-SPOT.TB是一种由酶联免疫斑点法技术发展的新技术,主要应用于结合感染后特异性T细胞所分泌的IFN-γ(γ干扰素),同时根据结果判断是否存在结核感染情况。本次报告以T-SPOT.TB应用在HIV/AIDS合并结核感染诊断中的特异性的价值为内容进行分析,同时选择收治的HIV/AIDS合并结核感染患者35例以及单纯性结核感染患者50例实施分析,具体诊断内容如下。
资料与方法
选取2018年11月-2019年11月门诊HIV/AIDS合并结核感染患者35例及单纯性结核感染患者50例。HIV/AIDS合并结核感染患者35例,男20例,女15例;年龄23~75岁,平均(49.08±4.37)岁;体重48~68 kg,平均(57.53±5.72)kg。单纯性结核感染患者50例,男28例,女22例;年龄24~74岁,平均(49.06±4.57)岁;体重49~67 kg,平均(57.52±5.76)kg。两组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
纳入标准:(1)年龄20~80岁;(2)所有患者均签署知情同意书;(3)本研究经过医学伦理委员会批准(H20180637);(4)经HIV试验初筛确认,两次结果均是阳性;(5)病情与《艾滋病诊疗指南》中的有关要求相符合;(6)症状、影像学、体征、细菌学结果、抗结核疗效诊断依据均满足《肺结核诊断和治疗指南》中的有关要求[1]。
排除标准:(1)无肾、心、脑、肝、消化道等慢性疾病;(2)合并急性感染;(3)语言、认知、精神、认知等存在障碍;(4)肾衰竭疾病;(5)拒绝接受结核感染T细胞斑点试验检验;(6)配合度较差。
方法:(1)检查试剂与设备:本次研究中所采用的检查试剂与设备包括结核感染T细胞斑点试验试剂盒、结核菌素纯蛋白衍生物针剂。SANYO CO2细胞培养箱购于日本三洋公司,所有诊断过程均严格按照实验室规定以及试剂说明书进行;(2)样本采集:告知85例患者均在第二次清晨采取血液,采集前保证至少空腹10 h以上,由专职护士抽取一侧5 m L肘静脉血,将血液标本放置在真空肝素抗凝管中,混合均匀;(3)结核菌素试验(PPD):将患者的左前臂掌侧的中下处通过皮内注射方法注射5个核菌单位的TB-PPD稀释液,于48~72 h内对比诊断结果。若硬结直径在5 mm之内判定为(-),硬结直径5~9 mm判定为(++),直径在15~19 mmm判定为(+++),直径超过20 mmm或是表面有双圈、水泡坏死情况判定为(++++)。其中,阳性诊断标准是(+++)与(++++),诊断结果参考《全国结核病防治工作手册》;(4)结核感染T细胞斑点试验:采集患者外肘静脉血,采集量5 m L,将血液标本实施外周血单个细胞(PBMC)分离处理,经血细胞分析仪计数后制成浓度是250 000个/100μL工作液,将其包被抗IFN-γ抗体微量板孔中,分别加入培养滤液蛋白、细胞培养液、6KD早期分泌靶向抗原。在阳性对照孔中滴加植物血凝素PHA,阳性对照孔不做任何处理。在含有5%二氧化碳的细胞培养箱中进行培养,控制温度37℃,时间16~20 h,经洗板与鼠抗人IFN-γ单抗反应、孵育、洗版以及底物显色等一系列的处理措施后,借助计算机辅助成像系统实施观察、统计、阅读。若阴性孔斑点数为0~5个,并与抗原A/B检测孔计数的差值超过6个,即可判定为阳性;若阴性孔斑点数超过6个,检测孔斑点数在2倍以上,同样为阳性[2]。
观察指标:对比不同诊断方法的检出结果,同时比较诊断灵敏度与特异度。
统计学方法:数据采用SPSS 19.0软件分析;计数资料以[n(%)]表示,采用χ2检验;计量资料以(±s)表示,采用t检验;P<0.05为差异有统计学意义。
结果
HIV/AIDS合并结核感染的检出情况分析:T-SPOT.TB检出单纯性结核感染阳性48例,HIV/AIDS合并结核感染阳性33例,总阳性率为95.29%;PPD检出单纯性结核感染阳性42例,HIV/AIDS合并结核感染阳性26例,阳性率为80.00%。T-SPOT.TB的阳性率显著高于PPD,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 HIV/AIDS合并结核感染的检出情况分析[n(%)]

诊断灵敏度与特异度:经分析发现,与PPD诊断相比,T-SPOT.TB诊断的灵敏度及特异度最高,特异度存在差异,差异有统计学意义(P<0.05);但是灵敏度无差异,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
表2 诊断灵敏度与特异度(%)

讨论
HIV以及结核病菌引起了全球的过度关注度,发展中国家的HIV/AIDS人群合并存在结核病,在非洲国家,结核病等登记率不但升高,因而该疾病可造成直接、巨大的社会与经济负担。我国是结核病的高发国家,全国第五次结核流行病学抽样调查结果显示,目前我国结核病患者人数已经有5亿人,具有病死率高、分布范围广、地区分布不均衡等特点。HIV/AIDS由于机体的免疫能力低下,极易受到各种细菌、真菌、病毒等各种病原体的感染,其中合并结核杆菌感染较常见[3]。HIV/AIDS合并结核感染的主要特点是病情复杂多样、传染性强、易混合感染,临床表现不典型,极易造成误诊与漏诊,延误病情,增加了疾病的诊断难度。因而,寻求一种科学、合理的诊断方法对于疾病的诊断及治疗具有重要意义。
目前,对于结核病的实验诊断,主要采取传统的培养方法和痰涂片镜检,同时也包括血清学检测与结核杆菌临床基因扩增法,上述方法检测时操作均较为复杂,检测的时间较长,且检测特异性与敏感性低,因而诊断缺陷较为显著。采取常规实验室方法对结核病实施检测时,检出阳性率不足60%,若患者合并存在HIV感染,因免疫功能缺陷,检测阳性率较低[4]。因而,寻求和开发一种更为简便、快速、敏感、特异性高的诊断方法为临床较为迫切的任务。结核感染T细胞斑点试验是近年来酶联免疫斑点发展的新型诊断技术,主要用于结核感染的诊断,是快速诊断结核感染的重要方法。T-SPOT.TB最早发现时间是1996年,Mahairas等在一段有结核分歧杆菌中存在“RDI”基因序列,改编码可以产生两种蛋白,分别是CFP-10以及ESAT-6,是特异性抗原刺激体特异性T细胞所产生的IFN-γ,该种技术主要是利用结核杆菌感染外周单个细胞中的T细胞进行试验[5]。在实施诊断时,通过利用人体感染结核分枝杆菌后可产生出记忆性的T淋巴细胞,若再次受到结核分枝杆菌特异抗原刺激,记忆性T淋巴细胞可快速增殖并成为效应性的T淋巴细胞。结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核感染诊断中的灵敏度较差,原因是HIV/AIDS患者的细胞免疫功能存在缺陷,而结核感染T细胞斑点试验为细胞免疫反应,因此敏感性不高。
综上所述,结核感染T细胞斑点试检测在HIV/AIDS合并结核感染的诊断中具有较高的诊断价值,可获取更加准确的监测结果,且结核感染T细胞斑点试验检测具有较高的诊断准确性和特异度,对于疾病的预后具有重要意义,可作为临床诊断HIV/AIDS合并结核感染的主要方法。

参考文献
[1]宋韬,李莉娟,付洪义,等.结核感染T细胞斑点试验在肺结核合并艾滋病患者中的诊断和影响分析[J].中国临床医生杂志,2019,47(12):1429-1432.
[2]张琳,朱蕾,陶丹,等.结核感染T淋巴细胞斑点试验检测艾滋病合并结核病患者的敏感度及影响因素[J].现代医学与健康研究电子杂志,2018,2(20):191-192.
[3]刘秋英,夏丽华,宋向荣,等.结核感染T细胞斑点试验对尘肺病合并结核感染排除筛查作用[J].职业与健康,2018,34(14):1905-1908.
[4]Elzi L,Steffen I,Furrer H,et al.Improved sensitivity of an interferon-gamma release assay (T-SPOT.TB?) in combination with tuberculin skin test for the diagnosis of latent tuberculosis in the presence of HIV co-Infection[J].BMC Infectious Diseases,2011,11(1):1-9.
[5]邹晶晶.探讨结核感染T细胞斑点试验诊断老年人肺结核的应用价值[J].医药论坛杂志,2019,40(5):171-172.

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